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以人体胎盘提取液皮内反应进行癌症普查的研究

来源:   如东县联丰化工有限公司从互联网收集整理   发布日期:2012-04-05 18:39:34

以人体胎盘提取液皮内反应进行癌症普查的研究

中国预防医科院流行病学徽生物学研究所 张见麟

中国科学院武汉病毒研究所 黄文林

湖北省沙市第一人民医院 黄凤翥

1962年松原正香发现人体胎盘与癌組织在生物学方面有相似之处,他以人体胎盘代替癌组织提取了抗原,对病人进行皮试,发现与尚未转移的早期癌的阳性率可高达94,5%。因此,日本全国癌症中心自1972年起已釆用此法进行癌症普查,国内一些单位也进行了某些报道,但至今尚未推广,究其原因,一则病例较少,同时还存在一些技术上难以推广的问题,如其安全性特别是乙肝抗原携带问顥,每次制品效价测定需在健康人身上进行,以及保存期等等。我们研究并解决了这些问题,为推广此法打下了基础,现报告如下。

1、材料与方法

1.1人体胎盘提取液的制备:取新鲜健康足月顺产第一胎产妇的人体胎盘,毎个胎盘血清事先均以放射免疫方法检査其是否拥带乙肝表面抗原,只有HBsAg阴性者才能采用。将胎盘剪去羊腆及血管,切成小块,边冲洗边挤压,直入3倍量无水乙醇,混勻置40C冰箱过夜。次日用滤纸过滤,滤后沉渣连同滤纸一起置40C冰箱中阴干,剥下称重,加入0.4%的酚,0.9%NaCl蒸馏水,使成3%(W/V)。溶液冰箱过夜后,以玻璃组织研磨器将将其磨碎混匀,滤器除菡,抽滤后澄清液即为胎人体盘提取液。

将上述提取液接种于肉汤培养基及髙层固体穿刺培养10天,无苗生长。并取体重18-20g小白鼠10只,一组不注射对照,另一组注入1:8稀释的人体胎盘提取液进行安全试验。观察注后30min、24h、48h、72h直到10天,两组小鼠均无异常反应。

1.2效价测定及保存:国内外报吿效价测定方法均为将提取液稀释成不同浓度,然后毎个浓度接种7〜8个健康人,选择皮肤反应大小正好在18-20mm之间的浓度为合适浓度(该浓度即为效价)。但此法较麻烦,不易推广,因此我们改用72型分光光度计,双缩尿法到水中无血色。称重后加入倍量50C蒸馏水,在搅拌器(12000r/min)中搅拌1min,共2次,成勻浆,——20C过夜冻结。次日在40C及室温中融解,补充50C蒸馏水,使成胎盘重量的3倍,搅拌均匀,矫正PH到6.0,置400C水浴,每小时顺时钟方向搅动1次。10h后40C冰箱过夜。取出后以2层纱布过滤,弃去沉渣,用0,1N NaOH将滤液的PH调整到6.4,冰箱过夜,次日以3000r/min离心7-8min,上清40C保存,沉淀加2倍量蒸馏水,用NaOH调PH到6.8,同上离心,弃沉渣,上清调PH到7.2,再置冰箱过夜,同上离心,将上清PH调到8.5。最后离心所得少最沉淀物与保存于冰箱内PH值6.4的上清混合在一起,測量体积,加测定O.D.来代替人休注射测效法,以不同浓度(1:4,1:6,1:8)注入健康人观察反应,并同时测O.D.540值,发现1:6时皮肤反应大小正好为18〜20mm,O.D.为0.06。

本试验采用取液保存方法保存效价,要达到0.05O.D.,保存4个月后的原液需1 :5稀释,而保存7-12个月后則需1:3稀释。

1.3皮肤试脍方法:在患者前臂正中1/3掌侧面,经75%酒精消毐后,用结核菌索注射器皮内注射人体胎盘提取液0.2ml,4h后观察反应并记彔。

2结果

2.1反应安全牲 3年间共观察各种病人及健康人455例,1例因事先没有详细询问皮肤过敏史,在皮内注射剂后72h发生全身过敏,体温轻度升高,经一般脱敏治疗后即痊愈。其余454人均无任何反应。

2.2诊断结果

2.2.1 对照组(非肿瘤病人及健康人)共160人,其中皮肤反应最大径超过25mm以上的有25人,阳性率为15.6%。25人中病人18人,其中7人为慢性淋巴结炎、淋巴结核,其他为慢性乳 腺增生、肝脓肿等,最长径平均大小为28.6mm。

2.2.2 观察I组(未未经抗癌治疗确诊为恶性肿瘤者)共191人,其中包括早期癌症128例,晚期癌症63例。早期癌症4 h皮肤反应超过25mm以上者共107例,阳性率达83.6%。其中早期消化道癌症阳性率高达92.8%(52/56),其次是早期生死泌尿系统癌症为91.3%(21/23)。晚期癌症阳性率较低,平均阳性率仅39.7%。早晚期合计 平均阳性率为69.6%。

2.2.3 观察II组(经抗癌治疗过的病人)共91例,平均阳性率为49.5%。

2.2.4 观察III组(未经治疗的良性肿瘤病人)共28例,阳性8人,平均阳性率为30.7%。

2.2.5 4组阳性率比较 经统计学检验(X2) ,对照组与观察I组的阳性率有明显差定 为肠癌。临床虽怀疑恶性肿瘤, 但皮试阴性,用其他方法最后否定恶性肿瘤典型病例有9例。在湖北省宜昌地区五峰县鱼关乡宫颈癌病人。其中皮试阳性的7人,可疑反应1人,阴性1人。而非癌妇女24人 中除3人可疑外,无1例阳性反应,符合率较高。

确诊为癌症,皮试阳性病 人3例,经地赛 米松3mg脱敏,第2次皮试仍保持阳性。而在非癌病人7例皮试阳性者经脱敏试验,其中5人转为阴性,2人仍保持阳性,2人中1人为过敏体质。通过脱敏试验证明胎盘皮试反应是特异的。

关于人体胎盘提取液的保存国内尚无报道。本研究对 40C保存的及稀释液进行了比较,结果证明稀释后保存的人体胎盘提取液,经4个月后效果明显下降(1:4),保存前O.D.为0.07,4个月后下降为0.03,而1:6稀释液保存前为0.06,4月后下降为0.015。而未经稀释的原液在40C下保存4个月,临用时再稀释,则效价不明显下降。更长时间的保存效果尚待观察。

总之,此法简单易行,对早期发现恶性,特别是消化道、生殖道癌症有较高符合率。我们的研究不仅用比其他报告者多10倍 人 异(P<0.001);观察I组与现察II组间阳性率也有明兄差异(P<0.001);对照组与观察III组比较无明显差异。

3、讨论

用简便方法进行癌症普贤査是早期发现癌症的重要手段,国内虽有少数单位试验过人体胎盘提取液皮内反应,但因安全性差、测效价难、观察例数少(几十例〉等原因未能推广应用。本文共观察455例,未转移早期癌平均阳性率达83.6%,特别是早期消化道癌及泌尿生殖系统癌,阳性率分别达91.3〜92.8%。即使晚期癌症与非肿瘤病人阳性率(15.6%)之间在统计学上也有非常显著差异,临床怀疑恶性肿瘤,皮试阳性,最后用病理学等方法确诊的典型病例有18例,其中笫16例陈X X临床疑似肠癌,但X光不支持,然而皮试阳性,最后用乙状镜确数证实这种方法的可靠性,而且进行了改进,特别对其安全性,人体胎盘血事先用放免测定乙肝抗原,同时以测光密度法代替在人体上测定效价,以及研究了保存时间及方法,这些均有利于本法进一步进行中间试验及大面积推广。